ABO/RhD血型定型檢測試劑卡操作指南
- 分類：操作指南
- 作者：
- 來源：
- 發(fā)布時間：2021-12-03
- 訪問量：0
【概要描述】ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。
ABO/RhD血型定型檢測試劑卡操作指南
【概要描述】ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。
- 分類：操作指南
- 作者：
- 來源：
- 發(fā)布時間：2021-12-03
- 訪問量：0
詳情
【試驗?zāi)康暮驮怼?/div>
ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細(xì)胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。
對于成年個體被檢者，紅細(xì)胞上的A和/或B抗原與血漿中的抗A和/或抗B抗體存在一種對應(yīng)關(guān)系。其獨特性質(zhì)在于：紅細(xì)胞上缺乏A和/或B抗原，則血清中存在與所缺乏的抗原對應(yīng)的強反應(yīng)性抗體，如紅細(xì)胞上缺乏A抗原，則可以預(yù)見血漿中存在抗A抗體。
常規(guī)的ABO定型必須包括正定型（紅細(xì)胞定型）和反定型（血漿定型），并將正反定型結(jié)果相互驗證，只有正反定型結(jié)果一致時才能準(zhǔn)確定型。
Rh陽性和Rh陰性的鑒定是通過檢測被檢者的紅細(xì)胞上是否有D抗原，有D抗原為Rh陽性，沒有D抗原則為Rh陰性。
ABO/RhD血型定型檢測試劑卡采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，將生物化學(xué)的凝膠分子篩過濾技術(shù)、離心技術(shù)和血型血清學(xué)的抗體特異性結(jié)合在一起，其中 抗A凝膠管中灌注了含抗A抗體的凝膠，抗B凝膠管中灌注了含抗B抗體的凝膠，抗D凝膠管中灌注了含IgM抗D抗體的凝膠。A細(xì)胞、B細(xì)胞及Ctl管中灌注 了不含血型抗體的凝膠，抗A、抗B及抗D凝膠管用于紅細(xì)胞上A、B及D抗原檢測，而A細(xì)胞、B細(xì)胞用于檢測血漿中的抗體，Ctl管用于自身對照。當(dāng)抗原抗 體反應(yīng)時，凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用下不能通過凝膠而留在凝膠上層或游離在凝膠中，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)；而抗原抗體沒有反應(yīng)時，未凝集的紅細(xì)胞在離心力的作用 下可通過凝膠而沉積在微柱凝膠管的底部，呈現(xiàn)陰性反應(yīng)。
【ABO/RhD血型定型檢測試劑卡的用途】
1. 用于輸血前檢測
(1) 鑒定ABO血型，以備選擇ABO血型相配合的血液用于交叉配血。
(2) 鑒定RhD血型，以備選擇RhD血型相配合的血液用于交叉配血。
2. 用于圍產(chǎn)期檢查
(1) 用于產(chǎn)前夫婦的ABO、RhD血型檢測，進(jìn)行新生兒溶血病產(chǎn)前預(yù)測。
(2) 用于產(chǎn)后母子的ABO、RhD血型檢測，進(jìn)行新生兒溶血病產(chǎn)后診斷。
3. 用于常規(guī)ABO、RhD血型化驗檢查，如健康體檢等。
【樣本要求】
1. 建議使用抗凝的血樣，尤其是EDTA抗凝管采集的血樣，需要量2ml 。（EDTA抗凝采血管為紫帽管）。
2. 血液樣本在采集后48小時以內(nèi)檢測。
【所需儀器設(shè)備及耗材】
1. ABO、RhD血型定型檢測試劑卡
2. 血型血清學(xué)離心機（用于離心分離血漿、洗滌紅細(xì)胞）
3. 微柱凝膠卡離心機
4. 微量移液槍及吸頭
【試驗操作】
按照下列步驟進(jìn)行操作
一、被檢血液樣本的處理及反定型A型、B型紅細(xì)胞的準(zhǔn)備
1. EDTA抗凝的血液樣本離心3000rpm 1分鐘，將上清血漿轉(zhuǎn)入一支12×75mm 試管中，余下的壓積紅細(xì)胞備用。如果血漿有不溶物（如混入的紅細(xì)胞）或不澄清透明，則需要將血漿再次離心，直到澄清透明不含不溶物為止。
2. 另取一支12×75mm試管中，加入0.1ml上述步驟1中的壓積紅細(xì)胞 ，用生理鹽水洗滌一次，棄上清，得到壓積紅細(xì)胞。
3. 在一支12×75mm試管中，加入1ml生理鹽水（或LISS液），加入步驟2中得到的壓積紅細(xì)胞10μl，混勻得到0.8~1%的被檢紅細(xì)胞懸液。
4. 將反定型A型、B型紅細(xì)胞用生理鹽水或LISS液配制成0.8~1%濃度。
二、ABO、RhD定型
1. 取ABO/RhD血型定型檢測試劑卡一片，注意檢查外觀，確保凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會干涸。將符合要求的卡進(jìn)行標(biāo)記，按照試驗需要撕開封口膜。
2. 用微量移液槍分別向抗A、抗B、抗D孔及Ctl孔的每孔樣品槽中沿樣品槽內(nèi)壁呈45°角緩慢加入50μl 0.8~1%濃度的被檢者紅細(xì)胞懸液。
3. 向A細(xì)胞孔中加入50μl 0.8~1%的A型紅細(xì)胞懸液。
4. 向B細(xì)胞孔中加入50μl 0.8~1%的B型紅細(xì)胞懸液。
5. 分別向A細(xì)胞、B細(xì)胞、Ctl孔中加入25μl 被檢者血漿。
6. 在臺面交替輕扣卡左下角和右下角，確保所加入的液體在卡的樣品槽中呈水平狀態(tài)，而不是偏向一側(cè)。
7. 將卡放入微柱凝膠卡離心機離心，LB-3000低速離心機一檔離心900rpm 2分鐘，再1500rpm 3分鐘，判讀結(jié)果并記錄。
【結(jié)果判讀及解釋】
1. 反應(yīng)陰、陽性的判讀
【注意事項】
1. 建議在使用凝膠卡前先離心再應(yīng)用。
2. 若凝膠卡封口開裂、孔中凝膠干涸或有氣泡，不可使用。
3. 撕開凝膠卡封口膜時，不能用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。
4. 樣本采集后應(yīng)盡快檢測，若試驗需要延遲，應(yīng)將樣本置2~8℃下短期儲存。
5. 紅細(xì)胞懸液的濃度為0.8~1%，濃度過高或過低會影響檢測結(jié)果。
6. 溶血、脂血、細(xì)菌污染等情況的標(biāo)本會影響檢測結(jié)果。
7. 血漿或血清標(biāo)本須充分離心去除纖維蛋白，否則會阻止紅細(xì)胞在微柱凝膠中的沉降，出現(xiàn)假陽性。
8. 人源血液樣本存在潛在的傳染性，凝膠卡使用后按醫(yī)療生物垃圾處理。
9. 在Ctl孔（自身陰性對照）結(jié)果為陽性時，試驗結(jié)果無效?？赡茉蚴怯捎诒粰z紅細(xì)胞已經(jīng)致敏IgM抗體導(dǎo)致自發(fā)凝集，此時可以用DTT將已經(jīng)致敏到紅細(xì)胞上的IgM抗體破壞后再行 ABO、RhD血型檢測。
10. 抗D凝膠不能鑒定弱D、部分D（如DⅥ）抗原。對于患者，如果抗D凝膠管中患者的紅細(xì)胞反應(yīng)為陰性，則確定為RhD陰性。
11. 若出現(xiàn)＜2+的弱陽性反應(yīng)，須做進(jìn)一步試驗才能準(zhǔn)確定型，即確認(rèn)弱反應(yīng)是由于被檢者的抗原減弱還是凝膠微孔之間的交叉污染引起。
12. 若出現(xiàn)混合視野反應(yīng)，需要了解被檢者近期3個月內(nèi)是否有輸血史，或被檢者是否為骨髓移植患者。
13. 由于6月齡以下的嬰兒其血漿/血清中不似成人一樣存在可預(yù)見的抗A/抗B抗體，因此只做正定型不做反定型。
【ABO正反定型不一致原因分析】
如果血型定型正反定型結(jié)果不一致時，則不能準(zhǔn)確定型，需要分析產(chǎn)生不一致的原因。 引起正反定型不一致的原因如下：
（一）正定型出現(xiàn)弱反應(yīng)或缺失抗原
1. A亞型、B亞型或AB亞型。
2. 白血病導(dǎo)致A或B抗原減弱。
3. 何杰金?。℉odgkin’s）有時會抑制抗原表達(dá)，與白血病類似。
4. 由于某種疾?。ㄈ绺骨话?、胰腺癌）導(dǎo)致血漿中存在大量的血型物質(zhì)，中和抗A或抗B抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性。 需要將正定型的紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌后再次定型可解決此問題。
5. 骨髓移植。
6. 非ABO同型輸血。
（二）正定型紅細(xì)胞上多余的抗原反應(yīng)
1. 自身凝集紅細(xì)胞、抗體致敏紅細(xì)胞導(dǎo)致。
2. 細(xì)胞未洗滌，血漿蛋白引起的假陽性反應(yīng)。
3. 細(xì)胞未洗滌，血漿中存在針對正定型試劑中某種成分的抗體導(dǎo)致。
4. 骨髓移植。
5. 獲得性B。
6. B（A）現(xiàn)象。
7. ABO非相合輸注。
（三）正定型出現(xiàn)混合視野反應(yīng)
1. 近期輸血。
2. 骨髓移植。
3. 異卵雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。
4. 胎兒和母體出血。
（四）反定型血清中出現(xiàn)弱反應(yīng)或反應(yīng)缺失
1. 年齡相關(guān)：新生兒以及小于6月齡的嬰兒以及老年人。
2. ABO亞型有亞型抗體，如A2、A2B型人的抗A1。
3. 低球蛋白血癥（如白血病人、使用免疫抑制劑患者、免疫缺陷患者）。
4. 移植患者使用抗排異藥物。
5. 雙胞胎或雙受精卵產(chǎn)生的嵌合體。
（五）反定型出現(xiàn)多余的抗體反應(yīng)
1. 冷自身抗體。
2. 特異性冷同種抗體A。
3. 血清中存在針對試劑紅細(xì)胞保存液成分的抗體。
4. 某些疾病導(dǎo)致球蛋白水平增高（多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、Hodgkin’s 淋巴瘤）引起緡錢狀凝集。
5. 輸用大分子血漿擴容劑。
6. 非ABO同型的移植。
7. 靜脈注射免疫球蛋白。
（六）技術(shù)方面的錯誤
1. 血液樣本被污染，如混入其他人樣本。
2. 被檢紅細(xì)胞的濃度過高或過低。
3. 忘記在反應(yīng)體系中加入檢測樣本或試劑。
4. 未按照試劑使用說明進(jìn)行試驗。
5. 離心步驟離心時間不足或離心時間超時。
6. 對試驗結(jié)果記錄或判讀不正確。
掃二維碼用手機看
上一個:
ABO亞型定型卡操作指南
上一個:
ABO亞型定型卡操作指南
- QQ咨詢
- 電子郵箱 libooffice0625@163.com
- 咨詢電話 0510-86990625
- 返回頂部
聯(lián)系我們
江蘇力博醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司
銷售部：0510-86990618、0510-86990633、0510-86990669
客服部：0510-86990655、0510-86990639
技術(shù)部：0510-86991102
地址：江蘇省江陰國家高新區(qū)東盛西路78號
Copyright ? 2021 江蘇力博醫(yī)藥生物技術(shù)股份有限公司 All rights reserved. 蘇ICP備14047883號-1 蘇公網(wǎng)安備 32028102000312號
互聯(lián)網(wǎng)藥品信息服務(wù)資格證書編號（蘇）-非經(jīng)營性-2021-0185 網(wǎng)站建設(shè)：中企動力 江陰 SEO標(biāo)簽
